Odgovor:
Western blot (protein imunoblot) je široko uporabljena analitična tehnika, ki se uporablja za odkrivanje specifičnih beljakovin v vzorcu tkivnega homogenata ali ekstrakta.
Pojasnilo:
Ključni elementi, potrebni za izpolnitev te naloge, so:
- ločevanje beljakovinskih zmesi po velikosti z uporabo gel elektroforeze.
- učinkovit prenos ločenih proteinov na trdno podporo.
- specifično detekcijo ciljnega proteina s približno primerljivimi protitelesi.
Sposobnost zahodnih blotov, da jasno pokaže prisotnost specifičnega proteina, tako po velikosti kot tudi po vezavi protitelesa, ju naredi dobro primernega za ocenjevanje nivojev ekspresije proteina v celicah za spremljanje frakcij med čiščenjem beljakovin.
V večini primerov se zahodne madeže uporabljajo v kombinaciji z drugimi metodami odkrivanja na osnovi ključnih protiteles, kot so ELISA ali imunohisto kemija.
Kaj je Western blot test na HIV?
Encimsko vezan imunski test (ELISA), znan tudi kot encimski imunski preskus (EIA). Serije krvnih preiskav se izvajajo za testiranje na HIV. Enzimsko-imunski test (ELISA), znan tudi kot encimski imunski preskus (EIA), je prvi test, ki ga bo izvajalec zdravstvenega varstva naročil na pregled HIV. ELISA test, tako kot Western blot test, odkrije protitelesa proti HIV v vaši krvi.
Kaj je lahko problem, če se pasovi ne pojavljajo v Western Blot?
Veliko ... Obstaja veliko razlogov, zakaj se pasovi morda ne pojavijo na Western blotu. Ali so kombinacije vzorcev in protiteles delale v preteklosti? Spodaj so samo nekateri, ki se lahko spomnim v tem trenutku, ki lahko povzročijo, da se pasovi ne pojavijo: Ali je bil protein prenesen iz gela? Poskusite obarvati membrano z nečim, kot je ponceau S ali amido črna, da vidite, ali so pasovi prisotni. Včasih lahko vidite beljakovinske trakove na membrani, tako da jih navlažite in držite pod kotom glede na svetlobo. Ali primarna protitelesa delujejo? To je težko preizkusiti in edini način, ki ga lahko naredite, je, da vključite
Zakaj se GAPDH uporablja v Western Blot? + Primer
GAPDH se pogosto uporablja kot obremenitveni nadzor. V Western blotingu pogosto uporabljamo GAPDH kot kontrolo nakladanja. To pomeni, da lahko s sondiranjem za GAPDH preverimo, da imamo na različnih pasovih madežev naložene enakovredne količine beljakovin. Primer uporabe - recimo, da imamo bolezen, za katero menimo, da povzroča zvišanje določene beljakovine v celici. Izdelali bi vzorec iz "zdravih" celic in drugega vzorca iz "bolnih" celic. Nato bi naložili ekvivalentne količine beljakovin obeh vzorcev na gel za Western blot. Po sondiranju blot-a za naš zanimiv protein smo ugotovili, da je v bolnih celi