V testu ELISA, kaj počnejo primarna protitelesa in sekundarna protitelesa?

V testu ELISA, kaj počnejo primarna protitelesa in sekundarna protitelesa?
Anonim

Odgovor:

To je odvisno od vrste testa ELISA.

Pojasnilo:

ELISA = Encimsko povezana imunosorbentna analiza.

Obstajajo različne vrste testov ELISA. Kar potrebujete, je:

  • protitelesa z vezanim encimom
  • antigen, na katerega se protitelo veže
  • substrat encima, ki povzroča merljivo reakcijo

The encim na protitelo je pogosto HRP (hrenova peroksidaza). HRP lahko reagira z različnimi substrati, ki bodisi spremeni barvo bodisi oddaja svetlobo, oboje merljivo.

Slika prikazuje pregled različni tipi testov ELISA. Razložil bom, kako delujejo spodaj.

Neposredno ELISA

Ploščo prevlečemo z antigenom (Ag) in a primarno protitelo dodamo encimu. Ko je substrat dodan, se bo reakcija odvijala in je sorazmerna s količino interakcij protitelesa in antigena.

Posredna ELISA

Ponovno, plošča je prevlečena z antigenom in a primarno protitelo se veže na antigen. A sekundarnih protiteles doda, da se veže na prvo protitelo. Drugo protitelo vsebuje encim, ki reagira s substratom.

Sandwich ELISA

Tu sta vključeni dve ali tri protitelesa. Zajemajoče protitelo je pritrjeno na plošče in se veže na antigen. Temu sledijo enaki koraki kot neposredno (samo eno protitelo) ali indirektna metoda (dve protitelesi).

Konkurenčna ELISA

Včasih imenovana inhibicija ELISA je nekoliko bolj zapletena. Plošča je prevlečena z antigenom, ki ga je treba raziskati. A primarno protitelo z encimom najprej inkubiramo z vzorcem z neznano koncentracijo istega antigena. Nato se doda na ploščo, tako da lahko protitelesa, ki še vedno reagirajo z antigenom na plošči. Po izpiranju kompleksov protiteles-antigen vzorca dodamo substrat.

Kadar neznani vzorec vsebuje veliko antigena, bo manj protiteles, ki se lahko vežejo na ploščo = nižji signal.