Kaj je kromatografska ionska izmenjava? + Primer

Kaj je kromatografska ionska izmenjava? + Primer
Anonim

Odgovor:

Gre za postopek ločevanja različnih beljakovin glede na naboj in vezivne lastnosti materiala.

Pojasnilo:

Pri različnih pH različni proteini nosijo različne naboje. Z namestitvijo mešanice beljakovin pri določenem pH lahko dobimo zmes, ki vsebuje beljakovine z različnimi lastnostmi.

Če se ta zmes beljakovin nalije na kolono, ki vsebuje material z nabojem na njem, bo kolona vezala beljakovine v nasprotnem naboru.

Nato lahko uporabimo različne raztopine, ki vsebujejo različne količine ionov, da eluiramo (odstranimo) beljakovine iz kolone.

Recimo, da imate mešanico beljakovin, iz katerih želite očistiti določeno beljakovino. Če ste vedeli, da je pri določenem pH vaša beljakovina, ki vas zanima, pozitivno napolnjena, lahko zmes zlijte na kolono, ki je vsebovala negativno nabito snov.

Vsi proteini, ki niso nosili naboja, ali ko bi negativno nabiti, bi tekli naravnost skozi kolono. Potem lahko sprostite svoj pozitivno nabit protein s poplavljanjem stolpca s pozitivnimi ioni, ki bi dopolnili negativni naboj na koloni. Ta konkurenca bi potem povzročila, da se beljakovina, ki vas zanima, eluira.

Tukaj je primer tega.

Vsak pladenj vsebuje pufer v različni koncentraciji in kot je razvidno iz 175 mM vzorca (zgornji levi kot) se zelo malo rdeče-rjavih beljakovin veže na nabito membrano, saj obstaja konkurenca med ioni v pufru in beljakovin za naelektrena mesta vezave na membrani (Ioni v pufru so "zmagali", ker jih je več, zato so preprečili vezavo beljakovin). V vzorcu v spodnjem desnem delu se veliko beljakovin veže na membrano, ker je manj prisotnih ionov, ki tekmujejo za vezna mesta.

V tem videu si lahko ogledate delovanje anionske izmenjevalne kromatografije: