Kaj je Western blotting?

Kaj je Western blotting?
Anonim

Odgovor:

Uporaba protiteles za detekcijo beljakovin, ki so bile ločene s SDS-PAGE in nato prenesene na membrano.

Pojasnilo:

Celice vsebujejo mešanico beljakovin (več tisoč) in jih lahko ločimo s SDS-PAGE.

Proteine iz SDS-PAGE se nato prenesejo z uporabo električnega polja iz gela na membrano, ki je običajno na nitroceluloza ali poliviniliden fluorid (PVDF).

Membrana se testira s primarnim protitelesom, ki je specifično za zanimivi protein. Za detekcijo primarnega protitelesa se nato uporabi sekundarno protitelo. Sekundarno protitelo bo vsebovalo marker, ki ga je mogoče zaznati s kemično reakcijo, bodisi da daje vidno trak na membrani, bodisi signal, ki ga lahko zajame specializirana kamera.

Če je potrebno, lahko na ta odgovor odgovorim zelo globoko, saj sem v svoji karieri izvedel več sto Western blots.