Kako znanstveniki izolirajo DNK, da bi jo lahko preučili?

Kako znanstveniki izolirajo DNK, da bi jo lahko preučili?
Anonim

Odgovor:

Obstaja nekaj korakov, da to storite, prosim, ne upoštevajte moje slabe angleščine, upam, da še vedno razumete proces.

Pojasnilo:

To ni tako težko, kot si morda mislite.

Recimo, da želimo izolirati DNK iz telečjega timusa, slediti morate tem navodilom (enaka sta za jabolko, kolikor vem, vendar obstajajo majhne razlike):

  1. Vzemite 3 kose po 3 gramov in jih razrežite na drobne koščke, čim manjše.

  2. Postavite ga v mešalnik, s 75 ml slanega natrijevega citrata (SSC) na kos in se prepričajte, da je rezilo mešala popolnoma prekrito s SSC, zato dodajte kos timusa, če je to potrebno.

    SSC zagotavlja, da se celične membrane raztopijo.

    Še naprej mešajte, dokler ni vse gladko.

  3. Postavite ga v epruveto za centrifugo in jo tarirajte z drugo cevjo, da se centrifuga ne zlomi

  4. Epruveto postavimo v centrifugo 20 minut pri 5000 vrt / min

  5. Ko cevke izvlečete iz centrifuge, morate videti dve komponenti. Dno ima trdno snov, to se imenuje pelet in to drži celično jedro z DNK. Videli boste tudi tekočo snov, ki se imenuje supernatant in je sestavljena iz SSC z raztopljenimi celičnimi membranami.

  6. Iztisnite supernatant v eni tekočini, to se imenuje dekantiranje in to vas pusti v pelete.

  7. V epruveto z majhno količino 2,2 M NaCl vstavimo peleto, tako da pelete pokrijemo z NaCl. NaCl povzroča obarjanje beljakovin, ki obkrožajo DNA.

  8. Mešajte s prazno epruveto ali mešalno palico. Sčasoma bi morali dobiti dve komponenti. Proteini na dnu in viskozna tekočina na vrhu.

  9. Vzemite viskozno tekočino s pipeto in poskrbite, da z viskozno tekočino ne boste vzeli nobenih beljakovin. (zelo majhnim delom beljakovin se je zelo težko izogniti, vendar se skušajte izogniti čim več beljakovinam)

  10. Postavite viskozno tekočino, ki ste jo pipetirali v čašo in ji dodajte 2x toliko etanola. Ampak dodajte etanol nežno, ker ga ne želite mešati z DNK. Pri vmesnem pasu med etanolom in viskozno tekočino boste opazili, da se pojavijo mehurčki DNK.

  11. Nežno premešajte s stekleno palico, DNK je negativno nabita, zato se mora držati palice.

  12. Vstavite ga v epruveto in jo raztopite s SSC.

Poseben stroj vam potem lahko pove, koliko DNK ste izolirali in kako čista je.