Zakaj se med čiščenjem beljakovin uporabljajo DNaze in lizocim v stopnjah lize?

Zakaj se med čiščenjem beljakovin uporabljajo DNaze in lizocim v stopnjah lize?
Anonim

Odgovor:

Da očistimo beljakovinske frakcije …

Pojasnilo:

Če čistite (pogosto specifično) beljakovino, se boste morali znebiti toliko smeti, kolikor jo lahko, ki bi lahko bila povezana z njimi.

V veliki meri je odvisno od tega, na katero beljakovino ste, ampak na splošno je to dobra ideja, še posebej v pripravka čiščenje, da se znebimo čim več nečistoč.

1:

Ker so beljakovine na splošno velike in se posledično pojavljajo v nižjih pasovih (ultracentrifugirane) frakcije, se želite znebiti vseh nukleinskih kislin, še posebej, če se beljakovina, ki jo označujete, nanaša na Pol1, Obratna transkriptaza ali kateri koli drugi encim, vključen v kopiranje / transkripcijo / prevajanje.

Nukleinske kisline, ki so prisotne v vzorcu, lahko ločite z uporabo DNAse: to bo popolnoma hidroliziralo DNA v njene sestavne dele.

Zavedajte se, da obstajajo različni DNK-ji, ki se razlikujejo po mehanizmu in specifičnosti svojega substrata. Odvisno od uporabljenega DNK se lahko prikaže Endo- ali Exo- dejavnost nukleacije …

Bolj natančno, RNAse je bolj primerna, saj je RNA običajno več v območju plovnosti / razpona beljakovin in se lahko veže na protein.

2:

Lizocim: Encim, ki ima vsaj dve funkciji:

To deglycosylates encimov: Večina beljakovin, ki se prenašajo v krvni obtok so Glycosylated: imajo nekaj molekul sladkorja pritrjena na njih. Lizocim bo odstranil ostanke sladkorja.

Prav tako ima sposobnost razgradnje celične stene gram-pozitivnih bakterij, zaradi česar so lizirajo. (če želite očistiti beljakovine iz Gram-pozitivnih bakterij)

Vsi razgrajeni proizvodi, bodisi nukleinske kisline ali ostanki sladkorja, se bodo pojavili na zgornjih delih epruvete za centrifugiranje zaradi njihovega "lažjega" vzgona.