Zakaj v PCR uporabljamo negativno kontrolo?

Zakaj v PCR uporabljamo negativno kontrolo?
Anonim

Odgovor:

Glej spodaj

Pojasnilo:

PCR deluje iz vzorca DNA. Recimo, da testirate na HIV (HIV je virus RNA, ko pa gre v celico, se spremeni v DNK …. tako da bo v okuženi celici DNK HIV). Primerji, ki jih boste uporabili, bodo izdelali izdelek (amplikon), ki ustreza delu DNK HIV. Če vidite ta amplikon, potem imate prisotno sekvenco HIV ….. če pa nimate negativne kontrole, lahko imate kontaminacijo.

PCR je izredno senzitivna. Obstaja veliko rešitev, ki se uporabljajo v PCR (voda, pufra, dNTPs, encim) … in vse se lahko z lahkoto onesnažijo z DNK iz drugih vzorcev ali celo iz amplikona, ki je nastal v reakciji, ki ste jo naredili včeraj. Torej, če imate vzorec DNK bolnika X in preverjate HIV s PCR, lahko začetni ojačevalci PCR povzročijo, da se zdravilo HIV izloči iz DNA DNA v vzorcu DNK bolnika X (če je ta oseba HIV), ali pa se lahko izklopi kontaminacija. Ampak ne morete povedati, ali je to posledica kontaminacije ali virusa HIV v DNK bolnikov.

Torej imate nadzor nad vodo. Cevka 1 postavite vse sestavine reakcije in za DNK dodate samo vodo. To je negativna kontrola. NIKOLI se ne bi smelo tukaj razširiti. V epruveti 2 vstavite vse reakcijske komponente in DNA bolnika X. Če dobite izdelek tukaj (in nič v cevki 1), ima bolnik X verjetno DNK HIV v svoji DNA. Če dobite izdelek v cevki 1 in cevi 2, imate problem s kontaminacijo in ne morete ugotoviti, ali je virus HIV v vzorcu bolnika posledica bolezni ali kontaminacije.

Torej vedno vodite kontrolo vode (voda namesto DNK).