Odgovor:
Da ostanejo nedotaknjeni …
Pojasnilo:
Omejevalni encimi se uporabljajo v zelo majhnih količinah, običajno pa se kupujejo v nekoliko večjih serijah.
Če za nič drugega, običajno raje naredite različne teste z isto serijo. Kupljeno serijo je zato treba shraniti dlje časa.
Večina encimov je popolnoma zadovoljnih v svojem pufru pri 4 stopinjah Celzija nekaj časa, vendar se bodo sčasoma razgradile. 24 ur je običajno sprejeta meja.
Za dolgoročno skladiščenje mora biti serija zamrznjena. -20C je standard in ga bo obdržal več mesecev. Za daljša obdobja (npr. Eno ali več let) je norma 70C.
Hitro jo je treba zamrzniti in v majhnih posodah (npr. Eppendorf), da se ne prepogosto odmrzne / zamrzne.
Da bi se izognili poškodbam beljakovin pri tako nizkih temperaturah, lahko dodamo stabilizatorje, kot so DTT (Di-Thio-Treitol), serumski albumin in, kar je najpomembneje, glicerol (5-50%).
Nenavadno je, da je pri -20 ° C potrebno uporabiti 50% glicerola, pri -70 glicerolu pa ni nujno, čeprav dodatek lahko pomaga stabilizirati beljakovine.
Zakaj so omejevalni encimi pomembni za DNA prstne odtise?
Omejevalni encimi razrežejo molekulo DNA le pri določenem vzorcu baz. Ker vsi organizmi (od neodvisnih zigot) imajo edinstveno DNA, bodo omejevalni encimi razrezali DNA na različnih položajih in različnih frekvencah. To ima za posledico različno število "kosov" različnih dolžin / velikosti. Polimorfizmi dolžine omejevalnega fragmenta (RFLP) je analiza fragmentov, ki nastanejo iz danih restrikcijskih encimov - delci so delno nabiti in se bodo odzvali na električna polja. Encim je pomemben, ker je proizveden "prstni odtis" odvisen od različnih velikosti kosov izrezane DNK, ki vzamejo različne količine čas
Zakaj so omejevalni encimi pomembni za tehnologijo rekombinantne DNA?
Omejevalni encim je glavno orodje rekombinantnega dna technologa - vsi omejevalni encimi pregledajo molekulo DNA v serumu specifične sekvence prepoznavanja. ko dobi specifično zaporedje prepoznavanja, se veže na lokacijo in reže vsako izmed dveh vej dvojne vijačnice na določenih točkah s hidrolizo fosfodiesterskih vezi. OMEJITVENI ENZIMI so klicani kot molekularne škarje.
Zakaj je bolj pomembno, da omejevalni encimi prepoznajo palindromne sekvence?
Kljub temu, da je endonukleaza, tj. Encim za razgradnjo nukleinske kisline, restrikcijska endonukleaza ne uniči naključno molekule DNA. Encimi se režejo samo na palindromske sekvence, da tvorijo manjše fragmente DNA. Omejevalni encimi se uporabljajo za rezanje krožne molekule DNA prokariontskega izvora. Ta tip endonukleaze pogosto proizvaja lepljive konce, ki pomagajo pri ustvarjanju rekombinantne DNA, t.j. lahko tujcni fragment DNA (ki vsebuje želeni gen) vstavimo v rez. Tehnologija rekombinantne DNA je odprla novo obzorje v biološki znanosti.